結晶の質を向上させる

1. 二次結晶化スクリーニングおよび結晶観察

AgroBox No.1の一次結晶化スクリーニング条件をもとに、さらに詳細な条件検討を行い、結晶の質を向上させます。一次結晶化スクリーニングだけでは、ほとんどの場合は質の良い結晶を得ることができません。そのため、より詳細な結晶化条件を検討する二次結晶化スクリーニングを行う必要があります。一般的には、一次結晶化スクリーニングで多数の結晶化条件で結晶が生成していた場合、どの条件に絞れば良いかの判断がつかず、二次結晶化スクリーニングの量も膨大な数を行う必要があります。結晶の「見た目（大きさや形）」と「質（分解能や結晶性）」は、必ずしも相関しないからです。そのため、間違った選択をすると、三次、四次…とスクリーニングのやり直しを行い続けることになります。

一方、本サービスでは、AgroBox No.1の結晶品質チェック（X線回折のスナップ測定）の結果に基づき、二次結晶化スクリーニングを行うため、効率的かつ迅速な条件最適化が可能になります。これに加えて、当社研究者の豊富な経験に基づき結晶化溶液マトリックス溶液をデザインし、バッファー自動調製システムDragonflyにて溶液を調製するため、極めて高い成功率が期待できます。

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具体的な作業は以下の通りです。一次結晶化スクリーニングおよび品質チェックの結果に基づき、当社研究者が1プレート分の96条件の結晶化溶液マトリックス溶液（pH、沈殿剤、塩濃度等）をデザインおよび調製し、二次結晶化スクリーニングプレートの作成と定期的な結晶観察を行います。

この二次結晶化スクリーニングでは、一次結晶化スクリーニング（AgroBox No.1）で見つかった元の結晶化溶液条件（元溶液）のうち、最大で4種類の元溶液の条件最適化を行います（24~96種の周辺条件/1種類の元溶液）。結晶化は基本的にシッティングドロップ法で行いますが、当社研究者の判断でハンギングドロップ法を行う場合もあります。結晶化は、通常20℃で行います（任意の温度をご希望の場合は、別途ご相談ください）。96条件のスクリーニングを行うためには、5 mg/ml以上の濃度のタンパク質溶液が25μl必要になります（0.20μl 分注）。